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如何更准确有效的做抗体鉴定

2019-05-24

)抗体的判定
1、抗体的效价判定 不管是用于确诊仍是用于医治,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价纷歧。判定效价的办法许多,包含有试管凝集反响、琼脂分散实验、酶联免疫吸附实验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的判定效价的办法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂分散实验来判定。
2、抗体的特异性判定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的辨认才能。抗体的特异性高,它的辨认才能就强。衡量特异性一般以穿插反响率来表明。穿插反响率可用竞赛按捺实验测定。以不同浓度抗原和近似抗原别离做竞赛按捺曲线,核算各自的结合率,求出各安闲IC50时的浓度,并按下列公式核算穿插反响率。
穿插反响率=IC50时抗原浓度(Y)/ IC50近似抗原物质的浓度(Z)X 100%
如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表明这一抗血清与其他抗原物质的穿插反响率近似为0,即该血清的特异性较好。
3、抗体的亲和力 抗体的亲和力是指抗体和抗原结合的结实程度。亲和力的凹凸是由抗原分子的巨细、抗体分子的结合位点与抗原决议簇之间立体构型的合适度决议的。有助于维持抗原抗体复合物安稳的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表明,K的单位是L/mol,一般K的范围在108~1010/mol,也有多达1014/mol。抗体亲和力的测定对抗体的挑选,确定抗体的用处,验证抗体的均一性等均有重要意义。
(二)抗血清的冻存
抗血清收成后,加万分之一的硫柳汞或万分之二的叠氮钠防腐,或参加等量的中性甘油,分装小瓶,置-20℃以下的低温保存,数月至数年内抗体效价无明显变化。留意防止重复冻融。也可将抗血清冷冻干燥后保存。