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miRcute增强型miRNA cDNA第一链合成试剂盒
2021-07-01
miRcute增强型miRNA cDNA第一链合成试剂盒采用加A法来进行miRNA第一链cDNA的反转录。本试剂盒采用了双组分形式，简化了实验操作流程，降低了操作失误的可能性。本产品中的miRNA RT Enzyme Mix包含了E.coli Poly(A) Polymerase、RTase和RNasin，其中的E.coli Poly(A) Polymerase不但具有高效的加A尾效率，还可特异性识别单链miRNA，避免了具有双链结构的miRNA前体的进一步逆转录反应；RTase经过分子改造，去掉了RNase H活性，增加了RNA模板亲和力，从而使得miRNA的逆转录反应具有更高的效率和灵敏度。本产品中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反应和逆转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证miRNA 3'末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。
产品特点
1. 省时省力。本试剂盒将miRNA的加A尾反应和逆转录反应合二为一，在减少操作步骤的同时也节省了一半的反应时间。另外，本试剂盒为双组分形式，操作过程中只需加入RNA模板和两个组分即可进行miRNA的逆转录反应，进一步简化了操作。
2. 特异性强。本试剂盒中的E.coli Poly(A) Polymerase和RTase都只针对单链的miRNA进行修饰和逆转录反应，可避免具有二级结构的miRNA前体进行逆转录反应。
3. 灵敏度高。本试剂盒通过将加A尾反应和逆转录反应的整合，实现了miRNA的加A产物可全部进行进一步的逆转录反应，大大提高了低丰度miRNA的检出率。
4. 适用广泛。本试剂盒可针对几乎所有材料提取的miRNA进行逆转录反应，模板的使用范围可达20 pg-2 μg(质量范围)和10 fM-100 pM (浓度范围)。
储存条件
收到本产品后，请立即置于-20℃下保存。从-20℃取出使用时，将miRNA RT EnzymeMix需放在冰中备用；将冻存的2×miRNA RT Reaction Buffer融解，融解后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后再行使用。
本产品于-20℃下可保存1年。
下游应用
染料法/探针法miRNA的荧光定量研究
注意事项
注：本试剂盒须与miRcute Plus miRNA荧光定量检测试剂盒(FP411)配套使用
图1. 使用TIANGEN miRcute增强型miRNA cDNA 第一链合成试剂盒(KR211)分别与国外知名Q公司(左)和国内T公司(右)的同类产品反转录人类miRNA mimics mix，之后用荧光定量检测
hsa-miR-133a-3p。结果显示，对于同一RNA样本，与竞品(蓝色线)相比TIANGEN KR211(红色线)反转录之后得到的cDNA量更大。KR211具有更高的反转效率。miRNA mimics mix上样量：2×108 copies；反转录体系：20 μl，取2 μl定量；定量试剂：TIANGEN miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)(FP411)；使用仪器：ABI 7500 fast。
图2. 使用TIANGEN miRcute增强型miRNA cDNA第一链合成试剂盒(KR211，上排)与国外知名Q公司(下排)的同类产品分别反转录人类Total RNA，之后用荧光定量检测hsa-miR-122-5p。结果显示，对于同一RNA样本，与竞品相比TIANGEN KR211具有更高的灵敏度和稳定性，更适合下游实验。Human Huh7细胞Total RNA提取采用TRNzolUniversal(DP424)。反转录上样量：100 ng-1 pg；反转录体系：20 μl，取2 μl 定量；定量试剂：TIANGEN miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)(FP411)；使用仪器：ABI 7500 fast。
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