本产品是通过SYBR® Green I嵌合荧光qPCR法进行Illumina®平台下高通量测序文库浓度测定的专用试剂盒。具体的工作原理是以Illumina® P5和P7芯片结合序列为引物,利用试剂盒提供的6个标准品绘制标准曲线,再根据标准曲线通过绝对定量法来计算待测文库的浓度。
试剂盒中提供的标准品共分为6个梯度,覆盖区间为20 pM~0.0002 pM,梯度间的浓度差别为10倍,标准品为线性双链DNA片段,片段大小为449 bp,GC含量为51.2%。
试剂盒中提供的10×qPCR Primer Mix中的引物是根据Illumina® P5和P7芯片结合序所设计,包括如下两种引物:
Primer 1: 5'-AATGATACGGCGACCACCGA-3';
Primer 2: 5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3'。
同时,试剂盒还提供了用于文库样品稀释的10×Library Dilution Buffer,方便客户对文库样品进行定量前的稀释。此外,本试剂盒不但可用于文库样品的定量,还可用于检测实验环境中文库污染的程度。
产品特点
? 简便快速:试剂盒提供了用于文库定量的所有试剂,操作简便快速,与 上游建库试剂盒兼容性好;
? 定量准确:检测试剂扩增效率高,特异性好,在0.0002 pM~20 pM 范围内均有很好的线性关系;
? 适应广泛:试剂盒提供的qPCR试剂具有良好的GC含量和扩增片段大 小普适性。