膜再生液可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后，可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验。一般stripping的原理都是利用蛋白变性以及利用beta-mercaptoethanol打开-s-s-，使一抗二抗解聚变性而被洗去，但洗脱的强度是一个关键，小了抗体洗不干净影响re-probe，大了又造成抗原的损失。

膜再生液可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后，可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验。一般stripping的原理都是利用蛋白变性以及利用beta-mercaptoethanol打开-s-s-，使一抗二抗解聚变性而被洗去，但洗脱的强度是一个关键，小了抗体洗不干净影响re-probe，大了又造成抗原的损失。

膜再生液的配制：

方法一：需要50℃温浴）

Stripping Buffer:β-mercaptoethanol 342 μl；20% SDS 5 ml；1MTris-Cl pH 6.7 3.125 ml；加ddH2O至50 ml。

方法：将用过的膜浸入stripping buffer中，置50℃水浴箱中30min，间断振摇。之后用TTBS洗5min/次洗到无beta-mercaptoethanol的味道就好。此时你已经可以按新的转移好的膜来再次使用了。

方法二:(仅适用PVDF，但这种方法抗原损失少，抗体洗脱也比较干净，我们比较过后也一直在使用）

Stripping Buffer：50mM Glycine-NaOH(pH10.8), 7M Guanidine hydrochloride, 100mM KCl, 0.2mM EDTA, add 22.5uL beta-Mercaptoethanol/10mL stripping buffer just before use.

1) After ECL development, wash membrane once for 10min with TBST/PBST.

2) Incubate the membrane in stripping buffer in a shake for 6-8min at RT.

3) Washed stripped membrane at least 3x for 8min each with TBST/PBST, then re-block.

这种方法stripping buffer可以重复利用2次，用时也较快，当然基于盐酸胍的配方还有很多，附件中也附一篇使用盐酸胍的文章，文中也比较了几种stripping方法，希望对lz有帮助；

方法三：（实际上此法没有洗去一二抗，但此法是理论上抗原无损失的）

也在附件中附上原文，原理就和IHC中封闭内源过氧化物酶的道理是一样的。

膜再生液的注意事项：

1. 膜再生液实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下将抗体洗脱下来， 实际操作中， 膜类型、 抗体类型、浓度及抗原特性都影响洗脱难易度。

2. 适用于 ECL 和类似的化学发光试剂进行的 Western 检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western检测，例如 DAB，NBT/BCIP。

3. 用 ECL 显色后，再生液洗脱几分钟后，可再次加入 ECL 显色液显影，如胶片上显示条带，表明抗体未除净，须进一步在再生液中浸泡，至胶片上无显色。

4. 使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用 BSA 封闭的膜更容易再生。

5. 尽量避免让膜干燥。