pGM-T是高效克隆 PCR 产物的专用载体,由克隆载体改建而成,使多克隆位点两侧的 3’端带 T。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在 PCR产物的 3’端添加一个 A,可与 pGM-T 载体 3’端的T互补连接,同时 3’T突出端可以防止载体的自身环化,因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。pGM-T载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子,其侧端和多克隆位点区相接,多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活使得菌落在指示培养基中呈现不同颜色,可根据颜色直接筛选重组克隆,白色克隆为阳性重组克隆,蓝色的为载体自连的克隆 (具体筛选原理见分子克隆第三版)。
克隆实验需自备IPTG、X-Gal、二甲基甲酰胺
注:M13 Reverse Sequencing binding site 176-197 M13 Forward Sequencing binding site 2949-2972